DOI: 10.36871/vet.san.hyg.ecol.201801008
УДК 619:579
Авторы
А. Б. КОНОНЕНКО, КАНД. БИОЛ. НАУК, ЗАВЕДУЮЩАЯ ЛАБОРАТОРИЕЙ
И. Б. ПАВЛОВА, Д-Р БИОЛ. НАУК, ПРОФЕССОР, ГЛАВНЫЙ НАУЧНЫЙ СОТРУДНИК
Д. А. БАННИКОВА, КАНД. ВЕТ. НАУК, ВЕДУЩИЙ НАУЧНЫЙ СОТРУДНИК
С. В. БРИТОВА, КАНД. ВЕТ. НАУК, СТАРШИЙ НАУЧНЫЙ СОТРУДНИК
Е. П. САВИНОВА, НАУЧНЫЙ СОТРУДНИК
Д. Н. НАБИУЛЛИНА, НАУЧНЫЙ СОТРУДНИК ФГБНУ «ВНИИ ВЕТЕРИНАРНОЙ САНИТАРИИ, ГИГИЕНЫ И ЭКОЛОГИИ»
Аннотация
Для изучения процесса образования биопленок микроорганизмы культивировали в 96-луночных планшетах, на мясо-пептонном бульоне, окрашивали 0,1%-м раствором кристаллического фиолетового в течение 10…15 мин, после чего не связавшийся краситель смывали. Количественный учет связанного красителя осуществляли методом спектрофотометрии при длине волны 490 нм. Предложена методика приготовления препаратов бактерий для световой и сканирующей электронной микроскопии на покровных стеклах, погруженных в чашки Петри с жидкой питательной средой. Взвесь бактерий в концентрации 105 м.к/мл в объеме 5 мл встряхивали на аппарате Vortex и вносили в чашки Петри с 20 мл мясо-пептонного бульона.
На стерильных предметных стеклах располагали стерильные обезжиренные покровные стекла и погружали их в жидкую питательную среду в чашках Петри.
Материал инкубировали в течение 18…24 ч при температуре 37°С. Затем пинцетом извлекали покровные стекла и часть из них окрашивали 1%-м водным раствором метиленового синего (для световой микроскопии), а часть размещали в чашках Петри с уложенными на дно фильтрами (для электронной микроскопии). Последние в целях сохранения естественной архитектоники прижизненно фиксировали парами 25%-го глутарового альдегида в течение 3…5 ч. Для контрастирования препаратов использовали пары 2…4%-го раствора осмиевой кислоты в течение 2…3-мин. После обработки парами осмиевой кислоты биопленки с включенными бактериями приобретали желтоватый или коричневый цвет. Полученные препараты после обезвоживания парами пропиленоксида и напыления ионами золота просматривали в сканирующем электронном микроскопе (СЭМ). Методика позволяет без нарушения естественной архитектоники изучать фазы развития биопленок и получать объективные данные о морфологии популяций патогенных и условно-патогенных бактерий.
Показано, что интенсивность образования биопленок патогенными микро-организмами, такими как сальмонеллы, иерсинии, золотистый стафилококк, была несколько выше, чем у непатогенных: эшерихий, протея, цитробактера, энтеро-бактера.
Ключевые слова
формирование биопленок, морфология популяций бактерий, устойчивость бактерий.
