DOI: 10.36871/vet.san.hyg.ecol.201902011
УДК 619:579

Авторы

КОНОНЕНКО А. Б., БАННИКОВА Д. А., БРИТОВА С. В., ПАВЛОВА И. Б., НАБИУЛЛИНА Д. Н., САВИНОВА Е. П.
ВНИИ ВЕТЕРИНАРНОЙ САНИТАРИИ, ГИГИЕНЫ И ЭКОЛОГИИ – ФИЛИАЛ ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН

Аннотация

Цель работы: осуществить мониторинг образования бипопленок условно-патогенными и патогенными микроорганизмами. В работе использовали культуры родов Salmonella, Escherichia, Yersinia, Proteus, Citrobacter, Enterobacter, Providencia, Morganella, Klebsiella, Cronobacter, Pseudomonas, Bacillus, Staphylococcus. Материалы и методы. Изучаемые микроорганизмы культивировали в полистироловых 96-луночных планшетах. Для этого в лунки с мясо-пептонным бульоном вносили суточную культуру микроорганизмов, предварительно установив концентрацию 104 м.к/мл, и инкубировали в течение 24…96 ч при температуре 37°С. Затем удаляли из лунок среду с планктонными клетками. В лунки планшета вносили по 200 мкл отфильтрованного 0,1%-го раствора кристаллического фиолетового и выдерживали планшеты в течение 10…15 мин при комнатной температуре. Затем удаляли из лунок краситель. Не связавшийся краситель тщательно смывали физиологическим раствором или дистиллированной водой. Планшеты переворачивали на фильтровальную бумагу и высушивали. Наличие и плотность биоматрикса (биопленки) определяли визуально по интенсивности окрашивания поверхности планшета. Затем для экстракции краски из пленки в лунки добавляли по 200 мкл 96%-го этанола и измеряли оптическую плотность на спектрофотометре КФК -3КМ при длине волны 590 нм. Результаты исследований. Результаты проведенных экспериментов позволили утверждать, что в течение 48 ч культивирования микроорганизмы формируют зрелую биопленку, которая может служить моделью для изучения процесса биопленкообразования. Биопленка микроорганизмов различных таксономических групп различается по плотности. Помимо этого даже бактерии, относящиеся к одному роду, в одинаковых условиях могут образовывать биопленку, плотность которой различается на 30…60 %.

Ключевые слова

микроорганизмы, условно-патогенные бактерии, бактериальные биопленки, оптическая плотность.