УДК 578, 579.66
DOI: 10.36871/vet.zoo.bio.202506116

Авторы

Екатерина Сергеевна Зубкова,
Мария Антоновна Пасивкина,
Алексей Максимович Воробьев,
Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г. Н. Габричевского, Москва, Россия
Андрей Владимирович Алешкин,
ООО «Орфан-Био», Москва, Россия
Эльдар Ринатович Зулькарнеев,
Николай Васильевич Пименов,
Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии – МВА имени К. И. Скрябина, Москва, Россия

Аннотация

Бактериофаги рассматриваются как перспективная альтернатива антибиотикам, особенно в случаях, когда стандартная терапия оказывается неэффективной из-за антибиотикорезистентности возбудителей. Получаемые в производстве бактериофаги требуют эффективной очистки от остаточных белков, ДНК бактериальных клеток, эндотоксинов и других загрязнений для обеспечения их безопасности, качества и соответствия нормативным требованиям. Таким образом, целью данного исследования является отработка технологии получения бактериофага SE40 в высоком титре, разработка и оптимизация многоступенчатого процесса очистки и концентрирования фаголизата, направленного на получение высокоочищенных и стабильных концентратов с повышенным титром вирусных частиц, пригодных для дальнейшего использования в фаготерапии. В ходе работы определили оптимальную питательную среду для культивирования, кинетику роста штамм-хозяина и соотношение множественности инфицирования для высокого выхода фаговых частиц. С целью очистки и концентрирования фаголизата проведена многоступенчатая фильтрация. На первом этапе фаголизат пропускали через стекловолоконные фильтры с порами 1,2 и 0,65 мкм, затем через полиэфирсульфоновые мембраны 0,45/0,22 мкм при постоянном потоке и давлении до 1,0 бар. Далее применяли систему тангенциальной фильтрации Sartoflow Smart с полисульфоновым рециркуляционным стаканом (1 л) для удаления остаточных белков, ДНК и эндотоксинов. Подачу раствора обеспечивал мембранный поршневой насос, а контроль давления – датчики на линиях подачи, пермеата и ретентата. В результате очистки фаголизата предложенным методом удалось снизить содержание эндотоксинов в 420 раз, остаточного белка – в 2,5 раза и остаточной ДНК бактерий-хозяев – в 15 раз. При этом концентрация бактериофагов составила 1011–1012 БОЕ/мл.

Ключевые слова

бактериофаг, фаготерапия, эндотоксин, TFF, антибиотикорезистентность