УДК 619:636.2:577.216:611.013.7
DOI: 10.36871/vet.zoo.bio.202508114

Авторы

Валерия Андреевна Макутина,
Анна Сергеевна Кривоногова,
Альбина Геннадьевна Исаева,
Егор Александрович Логинов,
Ирина Михайловна Донник,
Уральский Федеральный аграрный научно-исследовательский центр Уральского отделения Российской академии наук (ФГБНУ УрФАНИЦ УрО РАН), Екатеринбург, Россия

Аннотация

Для внесения заданных модификаций в геном предимплантационных эмбрионов сельскохозяйственных животных необходима эффективная технология доставки в оплодотворенный ооцит компонентов системы редактирования, например, на основе CRISPR/Cas9. Настоящее исследование было разработано для изучения влияния метода доставки комплекса редактирования генома на скорость эмбрионального развития, эффективность целевых изменений и уровень формирования бластоцист in vitro после нокаута заданных генов в зиготах крупного рогатого скота. Мы использовали два метода доставки комплекса гРНК и РНК cas9 для нокаута генов CD209 и bLG: трансдукцию AAV-2 и микроинъекцию в цитоплазму зиготы. Полученные данные показали, что трансдукция вирусом серотипа AAV-2 менее эффективна по уровню нокаута и значимо влияет на потенциал эмбриона к развитию: уровень формирования бластоцист снижался до 11,3 % по сравнению с контрольной интактной группой – 50 %. Метод микроинъекции в цитоплазму оказался в нашем эксперименте более эффективен по выходу редактированных эмбрионов и по количеству сформированных бластоцист, пригодных для переноса в матку коровам-реципиентам, – 31,1 %.

Ключевые слова

CD209, bLG, AAV, экстракорпоральное оплодотворение, редактирование генома, крупный рогатый скот